细胞裂解液配方和选择

• 阅读： 2024/2/1 15:10:43

  细胞裂解液的目的：

  （1）利用去垢剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；
  （2）溶解蛋白；
  （3）蛋白变性使其稳定；
  （4）抑制蛋白酶活性。

  常见的细胞裂解液成分：
  50mM Tris-HCl pH7.4 （缓冲体系）
  150mM NaCl （等渗体系）
  1mM PMSF （蛋白酶抑制剂）
  1mM EDTA （变性剂和稳定剂）
  5μg/ml Aprotinin （蛋白酶抑制剂）
  5μg/ml Leupeptin （蛋白酶抑制剂）
  1% Triton X-100 （弱变性剂）
  1% Sodium deoxycholate （中度变性剂和溶解剂）
  0.1% SDS （强变性剂和溶解剂）

  细胞裂解液的一般成分：

  1. 裂解成分：破坏细胞膜裂解组织或细胞。

  裂解强度：SDS（基本会使蛋白变性失活） > Triton X-100 > NP-40

  英文名	中文名	裂解强度和去垢剂类型	作用
  Sodium Deoxycholate	脱氧胆酸钠	中度；阴离子型	能够有效破坏多种蛋白间的相互作用
  1% Triton X-100	曲拉通X-100	温和；非离子型	溶解脂质，增加细胞膜的通透性
  0.1% SDS	十二烷基硫酸钠	强；阴离子型	强变性，极易促溶，能够有效破坏多种蛋白间的相互作用
  1% NP-40	乙基苯基聚乙二醇	温和；非离子型	可破坏掉细胞膜，获得胞浆蛋白，对核膜的破坏作用较弱

  2. 蛋白酶抑制剂：抑制蛋白酶的活性，避免蛋白过度降解。

  英文名	中文名	作用
  PMSF	苯甲基磺酰氟	抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶
  Leupeptin	亮肽素	抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶
  Aprotinin	抑肽酶	抑制丝氨酸蛋白酶
  Pepstatin	胃酶抑制剂	抑制天冬氨酸蛋白酶、多种微生物酸性蛋白酶
  EDTA-Na2	乙二胺四乙酸	多数核酸酶和有些蛋白酶需要金属离子激活酶的活性，EDTA可螯合金属离子，抑制酶活

  3. 磷酸酶抑制剂：抑制去磷酸化作用。

  英文名	中文名	作用
  NaF	氟化钠	抑制去磷酸化作用
  Na2VO4	钒酸钠	抑制去磷酸化作用
  Beta-glycerophosphate	β-甘油磷酸酯	抑制去磷酸化作用
  Na2PO4	磷酸钠	抑制去磷酸化作用

  * 可根据目的蛋白的特性对裂解液配方做出调整，例如：非磷酸化蛋白可不添加磷酸酶抑制剂；IP背景高，选用裂解度高的裂解液；目的蛋白IP 不下来，选用裂解度低的裂解液等等。

  细胞裂解液影响细胞膜和核膜的破坏效率， 所以应根据目标分子在细胞内的定位选择裂解液。此外，不同的细胞和组织具有不同的膜组成和结构，需要针对其特性选择特定裂解液。使用错误的细胞裂解液可能导致细胞裂解不完全，进而影响数据的准确性。

  适当的裂解液对于维持细胞内目标分子的稳定性和完整性至关重要。例如，在核酸研究中，裂解液会影响RNA、DNA及其修饰的完整性。在蛋白质组学中，它影响蛋白质和翻译后修饰的稳定性。使用错误的缓冲液可能导致这些分子的降解或变性，从而损害下游分析的准确性。

  细胞裂解液对试验结果的一致性有重要的影响。不同的缓冲液pH值、离子强度和去垢剂不同，这些因素可能影响酶、蛋白质和其他细胞组分的结构和活性。保持缓冲液一致性对于确保实验的可重复性至关重要。

  转自：“Super Lab”微信公众号

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